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Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒 红色荧光 货号31001

价 格
¥ 5136.0
起订量
≥250Tests
可售量
250Tests

产品分类

CLASSIFICATION

级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
产品规格 :
250 Tests
特色服务 :
免费技术咨询 顺丰包邮

产品详情

Product details

Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒 红色荧光


产品订购:QQ:1485814040
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简要概述

Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测蛋白激酶的试剂盒,。本试剂盒提供了一种快速、简单、均一的激酶活性检测法。它具有高灵敏度(<0·2 uM ADP)、宽ATP耐受性(1-300 uM),不基于抗体,无发射性和不需洗脱就可以对酶催化产生的总ADP进行检测,这些特性使它成为检测激酶米氏方程动力学,筛选和鉴定激酶抑制剂的一种理想试剂盒。本检测法可以便捷地用于96或384微孔板分析,并且无需任何分步操作就可以轻易地实现自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒。 



产品说明书

样品实验方案

简要概述

运行激酶反应(20μL)
添加ADP传感器缓冲液(20μL)
添加ADP传感器工作溶液(10μL)
在室温下孵育15分钟--1小时
监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度(截止= 570nm)


溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. 1ADP Sensor I储备溶液(50X):
将50μLDMSO(组分B3)加入到ADP传感器1(组分B1)的小瓶中,制备50X ADP传感器I储备溶液。

1.2ADP标准溶液(300 mM):
向ADP标准品(组分C)中加入100μLDdH2O,制成300mM ADP标准溶液。


2.标准溶液配制

ADP标准配制
取300 mM ADP标准溶液,在激酶反应缓冲液中稀释10,000倍,制成30μMADP标准溶液。 取30μMADP标准溶液,在激酶反应缓冲液中进行1:3连续稀释,得到ADP标准溶液的连续稀释液。 注意:通过包含不含ADP的样品来测量背景荧光,在激酶反应缓冲液中连续稀释ADP标准品。


3.工作溶液配制

将50μL50XADP Sensor I储备溶液加入到ADP Sensor II(组件B2)的样品瓶中,制成ADP Sensor工作溶液。 注意:重组的ADP不稳定,可根据需要制作新鲜溶液,随用随配。


操作步骤

1.运行激酶反应(此步骤不提供试剂):

1.1根据需要制备20μL(或对于384孔板10μL)激酶反应溶液/孔。 应根据需要优化激酶反应的组分(例如,特定激酶反应可能需要优化的缓冲系统)。 在大多数情况下,如果您没有优化的激酶缓冲液,ADP检测缓冲液(组分D)也可用于运行激酶反应。

1.2Amplite 荧光激酶检测试剂盒用于确定ADP的形成。


2.运行Amplite ADP分析:

2.1将20μLADP缓冲液(组分A)和10μLADP工作溶液加入每个充满20μL激酶反应溶液的孔中,使总ADP测定体积为50μL/孔。 对于384孔板,在每个充满10μL激酶反应溶液的孔中加入10μLADP传感器缓冲液(组分A)和5μLADP,使总ADP测定体积为25μL/孔。

2.2将反应混合物在室温下孵育15分钟至1小时。

2.3用Ex / Em = 540 / 590nm(截止值= 570nm)的荧光板读数器监测荧光强度。


3.生成ADP校准曲线(筛选激酶抑制剂不需要):

3.1添加20μL(对于96孔板)或10μL(对于384孔板)/孔ADP传感器缓冲液(组分A)和10μL(对于96孔板)或5μL(对于384) (间隔板)ADP传感器进入连续稀释的ADP标准品的每个孔中,使每个反应的总体积为50μL(对于96孔板)或25μL(对于384孔板)。

3.2将反应混合物在室温下孵育15分钟至1小时。

3.3用Ex / Em = 540 / 590nm(截止值= 570nm)的荧光板读数器监测荧光强度。

3.4生成ADP标准曲线。


数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ADP剂量样本。

图1.使用Gemini荧光酶标仪(Molecular Devices),在实心黑色384孔板中用Amplite Universal Fluorimetric Kinase Assay Kit测量ADP剂量反应。

 


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