西安百萤生物科技有限公司

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Cell Meter Beta-Arrestin蛋白质易位GPCR信号检测试剂盒 货号36390

价 格
¥ 9000.0
¥ 8999.0
起订量
100-400Tests
≥400Tests
可售量
100Tests

产品分类

CLASSIFICATION

级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
100 Tests
品牌 :
试剂盒
用途范围 :
科研试剂
特色服务 :
免费技术咨询 顺丰包邮

产品详情

Product details

简要概述

G蛋白偶联受体(GPCR)在通过配体结合激活后,都会通过一条共同途径发生脱敏作用。 β-arrestin(一种细胞质蛋白)与激活的受体的结合使GPCR信号失活,并启动了受体向细胞内的易位,在此细胞中配体被去除,受体被循环回到细胞膜。通过将荧光标记(例如GFP)附着到β-arrestin,可以检测受体arrestin复合物的位置。由于脱敏仅发生在激活的受体上,因此检测β-arrestin的易位和随后的受体再循环提供了检测GPCR靶标激活方法。 Cell Meter Beta-Arrestin蛋白易位GPCR信号试剂盒提供了强大的分析,可通过荧光成像筛选目标化合物针对已知或孤立GPCR靶标的活性。靶向GPCR的激活诱导荧光向细胞膜和内吞囊泡的移位。


适用仪器


荧光显微镜
激发:FITC滤波片
发射:FITC滤波片
推荐孔板:黑色透明底板



产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞进行转染
准备Transfectamine 5000-DNA混合物
将Transfectamine 5000-DNA混合物添加到细胞培养物中,并孵育过夜
转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中,并将培养物孵育过夜
在荧光显微镜下分析由GPCR激活


细胞准备

细胞密度在转染时它们将达到约60-70%的融合度。
转染前用新鲜的生长培养基替换。
注意:例如,对于6孔板,每孔替换为2 mL培养基,对于10 cm板,则替换为6 mL培养基。


储备溶液配制

除非另有说明,否则未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

β-arrestin-GFPDNA储备溶液
向小瓶β-arrestin-GFPDNA(组分A)中加入10 µL ddH2O,充分混合至终浓度为1 µg / µL。


操作步骤

1.将3 µg DNA(例如1.5 µg Beta-arrestin-GFP DNA储备液和1.5 µg您准备的GPCR DNA)与200 µL无血清培养基混合。
2.向混合物中加入9 µL Transfectamine 5000(组分B)。
3.充分混合并在室温下孵育20分钟。
注意:Transfectamine 5000和DNA的比例需要针对不同的细胞系进行优化,通常,在我们的测试中,Transfectamine 5000转染试剂(µL)与DNA(µg)的比例应为3-5 µL:1ug。

表1. 6孔板和10 cm板的样本表


6孔板(每孔)10cm板
新鲜培养基2 mL6 mL
质粒3 µg10 µg
无血清培养基200 µL600 µL
Transfectamine 5000转染试剂~9 µL~30 µL


转染方案
1.将Transfectamine 5000 -DNA混合物添加到培养板中,并孵育过夜。
注意事项:早在转染后16小时即可检测到重组蛋白。转染后72〜96小时可观察到表达水平。
2.转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中,并孵育过夜。
使用FITC滤光片(Ex / Em = 488/530 nm)在荧光显微镜下检测受体激活诱导的β-arrestin易位。


图示

图1. HeLa细胞中β-arrestin的易位。 HeLa细胞用β-arrestin-GFP和加压素受体2(V2R)瞬时转染。 HeLa细胞在6孔板中培养,并融合至〜60%。用9 µL Transfectamine 5000转染等量的β-arrestin-GFP(1.5 µg)和V2R质粒(1.5 µg)。转染后约30小时,将细胞转移到96孔板中。转染后约48小时,将加压素(1 µM)加入细胞中以诱导β-arrestin-GFP易位。使用FITC通道在荧光显微镜下加压素处理之前和之后2小时拍摄图像。


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