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针对转染实验答疑解惑

百萤对最近收到的许多客户关于转染实验遇到的问题进行了总结归纳,希望可以给其他准备/正在做相关实验的同学一点小小的帮助。

1.哪种水平的DNA纯度最适合转染?

回答:
虽然DNA纯度和浓度有一定范围,但是包括所选的转染试剂在内的几个因素可能会影响特定的过程。
建议:

  • 比较DNA /试剂浓度以获得最佳性能。

  • 在混合前检测DNA和试剂的不同孵育时间。

  • 将内毒素水平尽可能保持在最低。

  • A260 / A280的最理想纯度范围为(1.7-1.9),首先尝试在此范围内进行调整。


2.如何使用流式细胞仪确定转染效率?

回答:
使用流式细胞仪,确定特定转染程序非常容易:
建议:

  • 使用未转染的细胞进行对照,并从实验结果中减去基线强度数据。

  • 信号强度图是比较细胞系对不同转染试剂反应最简单有效的实验辅助工具。

一般不需要太多手动分析,大多数仪器都具有自带的FACS分析程序的软件,可快速获得结果。

3.转染后我的细胞快要死了,我该怎么办?

回答:
转染后细胞死亡有许多可能的原因,我们建议您使用以下三种方法进行检查:

  • 在不使用试剂的情况下对DNA进行额外的监测:表达的蛋白质可能具有毒性。

  • 检查是否有污染并根据需要进行处理,或者使用新的培养液进行实验。

  • 选择抗生素可能太强或添加太早。请以更低的浓度和更长的间隔再次尝试实验。


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2020-03-19

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