西安百萤生物科技有限公司

咨询热线

186-9157-6690

新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM 细胞渗透性 货号20651

价 格
¥ 3720.0
起订量
≥1
可售量
1

产品分类

CLASSIFICATION

级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
产品规格 :
10*50ug
特色服务 :
免费技术咨询 顺丰包邮

产品详情

Product details

新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性*

货号20651存储条件f/l
规格                           10x50 ug                       价格                         3720            
Ex (nm)492Em (nm)514
分子量1090.90溶剂DMSO
产品详细介绍


产品订购:QQ:1485814040
联系电话:18691576690
               02968064558

简要概述

        新型钙离子荧光探针Cal-520 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630提供最强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,这些钙敏感染料明显更亮,并提供更高的信噪比,大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内,Cal520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光Calbryte 染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表示细胞内钙的释放,这显着增加了Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM, Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

        除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外,Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂,可与绿色荧光蛋白(GFP)细胞系进行多色检测。 此外,Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发,并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化,可在555 nm激发,并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

点击查看实验方案



产品说明书

使用Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类

1.操作步骤

        Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存(干燥)并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的特定需求进行修改。

a)在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM,Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。

b)将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从百萤购买。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)添加到染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)

注意:各种ReadiUse 丙磺舒(包括水溶性钠盐和稳定溶液)均可从百萤购买。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟,然后将板在室温下再孵育15分钟。

f)用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂(如1 mM丙磺舒)的缓冲液替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)对于Calbryte 520 AM,在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试,对于Calbryte 590 AM,使用540/590nm进行钙测试,对于Calbryte 630 AM,使用610/640nm进行钙测试。


2.测量细胞内钙响应:

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 将CHO-K1细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜,在96孔黑色壁/透明底板中。将含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中,并将细胞在37℃下孵育45分钟。 用200μLHHBS替换染料加载培养基,加入50μL50μMATP,并使用FITC通道用荧光显微镜(Keyence)成像。

图2.用Calbryte 520或Fluo-4 AM测量的CHO-M1细胞中外源M1受体的卡巴胆碱刺激的钙响应。 在96孔黑壁/透明底板中,将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μLFluo-4AM或不含丙磺舒的Calbryte 520AM加入细胞中,并将细胞在37℃下孵育45分钟。 通过FlexStation 3(Molecular Devices)添加Carbachol(50μL/孔)以达到最终指示的浓度。

图3. CHO-K细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 在96孔黑壁/透明底板中,将CHO-K细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μL具有2mM丙磺舒的HbBS中的Calbryte 590AM或Calbryte  630 AM加入孔中,并将细胞在37℃下孵育1小时。 将染料加载培养基替换为200μLHHBS,用50μL50μMATP处理,并使用TRITC通道(Calbryte  590)和Texas Red Channel(Calbryte 630)用荧光显微镜(Keyence)成像。


提交成功