Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒

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简要概述

        Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，（ATP）在细胞能量学，代谢调节和细胞信号传导中起着重要作用。 ATP的定量可用于各种生物应用。由于ATP是几乎所有活生物体的能源，在缺乏有生物体的情况下它们迅速降解，因此其存在可用于识别活生物体的存在。 ATP的测量已用于细胞毒性，表面细菌的检测，水中细菌的定量，培养中的体细胞和食品质量。使用萤火虫生物发光来测量ATP最初是由McElroy提出的，他发现ATP对于轻量生产至关重要。萤火虫萤光素酶是单体61kD酶，其催化荧光素的两步氧化，其在560nm处产生光。 AAT Bioquest的ReadiUse 快速发光测定ATP分析试剂盒（不含DTT）带有即用型所有必需组分。它为监测哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性提供了一种快速，简单和均匀的发光测定法。该测定基于使用萤火虫萤光素酶来催化ATP和萤光素释放光的ATP的检测。它可以在化学发光酶标仪上以便利的96孔或384孔微量滴定板格式进行。该测定非常灵敏，可以检测50个细胞/孔。它具有稳定的半衰期超过2小时的发光信号。此ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂盒不含DTT。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒。 

产品说明书

操作步骤

简要概述
1.用测试化合物（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）制备细胞（样品）
2.添加等量即用型ReadiUse 快速发光检测ATP检测试剂（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监测发光强度

注意：为达到最佳效果，建议使用白色孔板。 在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

制备

为方便起见，请使用在线稀释计算器

用ddH2O或适当的缓冲液制备1mM ATP储备溶液，然后进行连续稀释以达到10 pM至10μM的ATP浓度。

有关细胞样品制备的指南（点击查看）

样品实验方案

表1.白色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 SD = ATP标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.用测试化合物处理细胞（或样品），在96孔板中加入10μL10X化合物，或在所需化合物缓冲液中加入5μL5X化合物用于384孔板。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。
2.将细胞板在37℃，5％CO₂培养箱中孵育所需的时间段，例如24,48或96小时。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂。
4.在室温下孵育10-20分钟。 注意：将未使用的ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂等分并保存在-20 ℃，避免反复冻融循环。
5.用标准光度计监测发光强度。
 
数据分析
 
        从空白标准孔获得的读数（RLU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算细胞样本。 我们建议使用在线线性回归计算器，该计算器可在以下位置找到：