ReadiUse Bio-Gel P-6离心柱

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简要概述

ReadiUse Spin色谱柱，用于缓冲液交换和脱盐应用。将材料应用于旋转柱时，小于色谱柱排除极限（MW〜6000）的物质将保留在色谱柱中，大分子（如蛋白质）（MW大于15,000）将被缓冲液洗脱。样品体积为30uL至100uL。它们与带有2.0 ml微量离心管或12 x 75试管的旋转桶式离心机兼容。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的ReadiUse Bio-Gel P-6色谱柱。

产品说明书

操作步骤

1. 多次旋转离心柱，使沉降的凝胶悬浮并去除气泡。
   
   

2. 摘下尖端部分盖子，然后将色谱柱放入微量离心管（2 mL）中。取下上端盖子，使多余的填料缓冲液在重力作用下排出，直至到达管内凝胶顶部。如果色谱柱没有开始流动，则将盖子推回色谱柱，然后再次将其取下以开始流动。去掉耗尽的缓冲液，然后将色谱柱放回试管中。
   
   

3. 在1,000 xg的旋转桶式离心机中离心1分钟，以除去缓冲液。
   
   

4. 将1 mL平衡缓冲液加到色谱柱上。通过重力使缓冲液流失或将色谱柱离心1分钟以除去缓冲液。从收集管中丢弃缓冲液。重复此过程3-4次。
   
   

5. 在1,000 xg的旋转桶式离心机中离心2分钟，以除去反应缓冲液。
   
   

6. 将色谱柱放在干净的2.0 ml微量离心管或12 x 75 mm试管中。小心地将样品（20–100 µl）加入色谱柱的顶部中心。可能需要仔细调整样品量以达到性能。
   
   

7. 上样后，以1,000 x g离心色谱柱5分钟。
   
   

8. 离心后，纯化的样品现在位于平衡缓冲液中，并且将保留小于色谱柱排除极限（〜6000）的分子于色谱柱中。
   
   

9. 收集洗脱液，并正确处理用过的色谱柱。注意：旋转柱可放入2 mL微量离心管或12 x 75 mm试管中，以在离心过程中收集样品。使用色谱柱随附的2 mL微管进行初始色谱柱平衡步骤。注意：摆动桶式离心机能够产生至少1,000 xg的力，适用于Bio-Spin色谱柱。在特定转速下产生的重力是微量离心机转子半径的函数。有关从每分钟转数（RPM）转换为离心力的信息，请参阅离心机说明书。或者，使用以下所示的公式来计算达到1000 x g引力所需的RPM速度。

CF（g）=（1.12 X 10 ^-5）X（RPM）² X r                 

RCF =相对离心力，
RPM =转子速度
r =从转子中心到Bio-Spin色谱柱中间的半径（cm）

图示

图1. 预装的ReadiUse Bio-Gel P6离心柱。 该柱用PBS缓冲液中的P-6 DG填充，样品体积为50〜100 uL。分子量极限约为6000，大分子（如蛋白质）（分子量> 15,000）将用缓冲液洗脱。