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免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基 货号36331

价 格
¥ 4980.0
起订量
≥10Plate
可售量
10Plate

产品分类

CLASSIFICATION

级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
产品规格 :
10 Plate
特色服务 :
免费技术咨询 顺丰包邮

产品详情

Product details

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基

货号36331存储条件                  f/l
规格                     10 Plate                    价格4980               
Ex (nm)523Em (nm)551
分子量
溶剂
产品详细介绍

产品订购:QQ:1485814040
联系电话:18691576690
               02968064558


简要概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定,用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的最亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内,Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解,产生带负电荷的荧光染料,并留在细胞内部,并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时,受体信号释放细胞内钙,这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长,高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性(当与钙形成复合物时),使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法,用于检测G蛋白偶联受体(GPCR)和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行,并易于适应自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。



产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞

  2. 除去生长培养基

  3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)

  4. 在室温下孵育1小时

  5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度


溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液:将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW(组分A)中并充分混合,避光。 注意:10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液(1X):a)对于#36330(1个板试剂盒)和#363331(10个板试剂盒),通过将9 mL HHBS(组分C)添加到10XPluronic®F127 Plus(1 mL,组分B)中来制成1X分析缓冲液,并充分混合。b)对于#36332(100板试剂盒),通过向10XPluronic®F127 Plus(10 mL,组分B)中加入90 mL HHBS(未包括)制成1X Assay Buffer。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。


工作溶液配制

Rhod-4 NW上色溶液:将10 µL Rhod-4 NW储备液添加到10 mL 1X分析缓冲液中,并充分混合。 注意:该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。


实验步骤

1.从细胞板中去除生长培养基。注意:重要的是去除生长培养基,以大程度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。或者,使细胞在含1-5%FBS的生长培养基中生长,以避免培养基去除步骤。在这种情况下,需要在HHBS缓冲液中添加2X染料。 [我们为在生长培养基中使用0.5-1%FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个单独的免洗钙测定试剂盒(Cat.#36334和Cat.#36335)。

2.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

3.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟,然后在室温下再孵育30分钟。注意:如果测定需要37°C,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作,则在室温下孵育细胞板1-2小时。

4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

5.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度进行钙通量检测。


图示

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 去除生长培养基,并使用Screen Quest Rhod-4 NW钙分析试剂盒将细胞与100 µL染料上样溶液或室温下100 µL Rhod-2 AM溶液(5 µM)孵育1小时。 NOVOstar(BMG Labtech)添加了卡巴胆碱(25

 


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