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Cal-520, 钠盐 货号21136

价 格
¥ 4980.0
起订量
≥1mg
可售量
1mg

产品分类

CLASSIFICATION

级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
产品规格 :
1mg
特色服务 :
免费技术咨询 顺丰包邮

产品详情

Product details

钙离子荧光探针Cal-520, 钠盐

货号                                 21136                           存储条件f/l                                   
规格1mg价格4980
Ex (nm)492Em (nm)514
分子量840.54溶剂Water
产品详细介绍


产品订购:QQ:1485814040
联系电话:18691576690


简要概述

      Cal-520®提供了一种功能强大的基于荧光的均质检测工具,用于检测细胞内钙的动员。Cal-520®AM是一种新型的荧光钙敏感染料,与现有的绿色钙指示剂(如Fluo-3 AM和Fluo-4 AM)相比,信噪比和细胞内滞留性显着提高。表达通过钙信号的感兴趣的GPCR或钙通道的细胞可以预装可穿过细胞膜的Cal-520®AM。一旦进入细胞,Cal-520 AM的亲脂性封闭基团就会被酯酶裂解,从而产生带负电荷的荧光染料,并留在细胞内部。与钙结合后,其荧光大大增强。当细胞被激动剂刺激时,该受体发出信号释放细胞内钙,可以显着提高Cal-520®的荧光。Cal-520®AM具有长波长,高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性,使其成为测量细胞钙的理想指示剂。高信噪比和更好的细胞内滞留性使Cal-520®钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的强大工具。Cal-520®钠盐或钾盐是细胞中Cal-520®AM的水解盐。它选择性地与钙离子结合,并具有强烈依赖于钙浓度的荧光。

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产品说明书

使用Cal-520 AM,Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 AM酯:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b)在实验当天,将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)以减少渗漏去酯化指标。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意:孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f)用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)在Ex / Em = 490 / 525nm(对于Cal-520 AM),540 / 5000nm(对于Cal-590 AM)或600 / 640nm(对于Cal-630 AM)进行实验。


2.测量细胞内钙响应:

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。


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