西安百萤生物科技有限公司

咨询热线

186-9157-6690

免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36550

价 格
¥ 2460.0
起订量
≥1plate
可售量
1plate

产品分类

CLASSIFICATION

级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
产品规格 :
1 plate
特色服务 :
免费技术咨询 顺丰包邮

产品详情

Product details

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

货号36550                     存储条件                      Multiple
规格                      1 Plate价格2460                  
Ex (nm)495Em (nm)516
分子量
溶剂
产品详细介绍



简要概述

钾(K+)离子通道在调节基本生物过程(包括心率,激素和神经递质分泌,水和电解质平衡)中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐,疼痛,糖尿病,神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl +通过K+通道的渗透性已被广泛用于测定K+通道。表达目的K+通道的细胞(例如hERG,Kv1.3,Kir2.1,KATP)预先装有Tl+敏感染料。该染料是非荧光的,并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后,非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl+刺激缓冲液添加到细胞中时,Tl +会流过K+通道并与Tl+敏感染料结合,从而产生荧光信号。该信号与K+通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞,则荧光信号分别降低或升高,以反映K+通道的抑制或刺激活性。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。



产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞

  2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)

  3. 在37°C孵育1小时

  4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟

  5. 加入Tl2SO4 / K2SO4刺激溶液(96孔板为50 µL /孔,384孔板为12.5 µL /孔)

  6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度


溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液:将20 µL(#36550)或DMSO(#36551和#36552)的DMSO加到TI-520 AM(组分A)的小瓶中,并充分混合。 注意:未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液(1X):将1 mL的10XPluronic®F127 Plus(组分B)添加到9 mL的HHBS缓冲液(组分C)中并充分混合。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus(组分B)。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液(1X):在8 mL的ddH2O中加入2 mL的无氯缓冲液(5X)(组分D),并充分混合。

4. Tl2SO4溶液(未提供,Sigma Cat#208191):将Tl2SO4溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意:Tl2SO4有毒。 采取必要的预防措施,以防止吸入和皮肤接触。


工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液:将20 µL TI-520 AM储备溶液(500X)加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液(5X):在1X无氯化物缓冲液中用Tl2SO4稀释配体(用于非电压门控钾通道)或K2SO4(用于电压门控钾通道)。

表1.应针对每个靶标优化参考(HEK293-KCNH2细胞中的电压门控hERG通道),Tl2SO4和K2SO4(电压门控钾通道)或配体(非电压门控钾通道)的浓度及细胞类型。

组分

容积

5X 浓度

最终浓度

无氯缓冲液(5X)

2 mL



K2SO4 (250 mM)

1 mL

25 mM

5 mM

TI2SO4 (80mM)

0.5 mL

4 mM

0.8 mM

ddH2O

5.5 mL



总计:

10 mL




实验步骤

1.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时,然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意:如果测定需要37°C,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K+通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂(用于抑制研究)将板孵育30分钟。

5.用FLIPR,FDSS或Flexstation加50X /孔(对于96孔板)或12.5μL/孔(对于384孔板)的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。


图示

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑,并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM,0.5 mM,0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。



提交成功