Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒 *1板*

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简要概述

肿瘤细胞对细胞药物的耐药性被认为是化疗成功的主要障碍之一。有些肿瘤最初是耐药的，对细胞抑制药物治疗没有反应；另一些肿瘤最初反应良好，但最终会再生并产生耐药性。这种现象可能是由所给抗肿瘤药物诱导的基因突变引起的，也可能代表恶性肿瘤中已存在的耐药细胞群的选择。多药耐药（MDR）是多种化疗失败的主要因素。在过去的几年中，人们普遍认为化疗耐药性与至少两个ATP依赖的药物外排的过度表达有关。这些细胞膜蛋白，称为P-糖蛋白（Pgp，MDR1）和多药耐药相关蛋白（MRP1）是ABC转运体家族的成员。我们的检测试剂盒使用荧光MDR指示剂来检测这两种MDR活性。这种疏水性荧光染料分子迅速穿透细胞膜并保留在细胞内。短时间培养后，细胞内游离染料浓度明显增加。在表达MDR1和/或MRP1的细胞中，该染料被MDR转运体挤压，从而降低细胞荧光强度。然而，当其挤压被干扰MDR1和MRP1活性的试剂阻断时，其细胞荧光强度明显增加。我们的MDR检测试剂盒提供了一个优化的检测方法的所有必须成分。该方法可在96孔或384孔微孔板中进行，且易于自动化。该试剂盒是高通量筛选MDR抑制剂或鉴定具有高水平MDR活性细胞的理想试剂盒。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 准备细胞

2. 添加MDR抑制剂或化合物

3. 添加MDR染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）

4. 在室温下孵育1小时

5. 使用底部读取模式检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

MDR指示剂储备溶液：将20 µL（#36340-1板）或200 µL（#36341-10板）添加到MDR指示剂（组分A）中，并充分混合。 注意：20 µL MDR指示剂原液足以装满一块板。 未密封的MDR指示剂原液可以分装，并在<-20℃下保存1个月。 避光，并避免反复冻融。

工作溶液配制

MDR染料加载溶液：将20 µL的MDR指示剂储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分C）中，并充分混合。 注意：MDR染料加载溶液足以装满一块板，并且在室温下至少可稳定2小时。

实验步骤

1. 通过将10 µL的10X（96孔板）或5 µL的5X（384孔板）化合物加入化合物缓冲液（如PBS或HHBS）中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。抽吸后，向孔中添加相同体积的HHBS（例如，对于96孔板为90 µL，对于384孔板为20 µL）。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2. 在室温下或在37℃，5％CO₂的培养箱中孵育细胞板至少15分钟。

3. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的MDR染料加载溶液。

4. 在避光条件下，于室温下孵育染料加载板1小时。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。注意：上样后请勿洗涤细胞。注意：对于非贴壁细胞，建议在孵育后以800 rpm离心细胞板2分钟。

5. 使用底部读取模式检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度。

图示

图1.环孢菌素A对MCF-7 / ADR细胞中P-gp的抑制作用。 环孢菌素A浓度的增加导致荧光信号的增加，这是由于P-gp的抑制所致，从而增强了MDR指示剂染料在细胞内的积累。 EC50 = 2.4μM（用试剂盒测量）。