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AAT Bioquest mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯 货号1160

价 格
¥ 3720.0
起订量
≥1mg
可售量
1mg

产品分类

CLASSIFICATION

级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
科研试剂
特色服务 :
免费技术咨询 顺丰包邮

产品详情

Product details


mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯

货号                   1160                    存储条件f/l
规格1 mg价格
Ex (nm)552Em (nm)564
分子量1838.37溶剂DMSO
产品详细介绍


产品订购:QQ:1485814040
联系电话:18691576690
                 02968064558

简要概述

        mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料,mFluor 染料是一系列优秀的荧光标记染料,可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用最小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。

        琥珀酰亚胺基(NHS)酯被证明是用于胺修饰试剂,因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:当使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前,还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。然而,对于特定的标记反应,可能需要升高或降低的温度。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯。 

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产品说明书

操作方法

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml,如果可能)混合至100μL给1 mL蛋白质标记原液。

注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注3:用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。

注4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率显着降低。为获得标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。


2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到mFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合之前准备染料储备溶液(溶液B)及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。 避免冻融循环。


3.确定染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响,而低染料/蛋白质比率的蛋白质结合物会降低灵敏度。 我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 - 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2进行缀合反应(参见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1; 分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比(DOS)。

3.6运行上述4种结合物的功能测试,以确定染料/蛋白质比例,以扩大您的标记反应。


4.运行结合反应:

4.1在有效摇动下,将适量的染料储备溶液(溶液B)加入到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中。

注意:溶液B /溶液摩尔比由步骤3.6确定。 如果跳过步骤3,我们建议使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。


5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接从步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在树脂顶部表面下方运行后立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 - 蛋白质缀合物的级分。

注1:立即使用时,染料 - 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注2:对于长期储存,染料 - 蛋白质结合物溶液需要浓缩或冷冻干燥


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